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更新時(shí)間：2022-12-16      瀏覽次數(shù)：835

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針對每一類生物的主要marker序列都有相應(yīng)的數(shù)據(jù)庫以方便比對鑒定。如 RDP數(shù)據(jù)庫(RibosomalDatabase Project)、SILVA數(shù)據(jù)庫(一個包含細(xì)菌、古菌、真核rRNA基因序列的綜合數(shù)據(jù)庫)、Greengenes(針對細(xì)菌、古菌16S rRNA基因)數(shù)據(jù)庫、 PR2(ProtistRibosomal Referencedatabase)數(shù)據(jù)庫(針對真核微生物18SrRNA基因)等等。

微生物檢測主要用于輔助診斷，百億級市場市場空間，潛力很大

你可能知道，“抗生素濫用”在中國很普遍。改變這個現(xiàn)狀就要靠微生物檢測。2011年衛(wèi)生部頒布了苛刻的《抗菌藥物臨床管理辦法》，把微生物檢測的地位提到了的高度。

微生物檢測屬于IVD的一個細(xì)分領(lǐng)域，是對感染性疾病的病原體或代謝物進(jìn)行檢測分析，在臨床上通常用于輔助診斷，判斷感染類型、指導(dǎo)用藥，鑒定環(huán)節(jié)越準(zhǔn)確，診斷結(jié)果和治療方案選擇越恰當(dāng)。如果沒有微生物檢測，醫(yī)生傾向于過度用藥，或重復(fù)試藥，可能導(dǎo)致微生物耐藥性或病情延誤。

華大基因的一位從業(yè)人員認(rèn)為，臨床微生物檢測的市場空間達(dá)到400億元。2015年，范圍內(nèi)微生物檢測占IVD行業(yè)份額為18%，在眾多細(xì)分領(lǐng)域中僅次于POCT，臨床對于微生物檢測的需求日趨增長。

我國醫(yī)療機(jī)構(gòu)常規(guī)臨床微生物檢測項(xiàng)目有7類，152項(xiàng)，主要包括八大類：真菌、放線菌、螺旋體、細(xì)菌、立克次氏體、衣原體、病毒和支原體。其中細(xì)菌檢測81項(xiàng)，占比為52.5%。

傳統(tǒng)微生物檢測方法在檢測時(shí)間、可檢測的微生物數(shù)量、靈敏度等方面存在很多不足。

目前，微生物實(shí)驗(yàn)室使用的檢測產(chǎn)品大部分以傳統(tǒng)方法為基礎(chǔ)。傳統(tǒng)檢測方法分為染色法、培養(yǎng)法、非培養(yǎng)法三種。目前常用的方法為生化原理檢測，先判斷革蘭式陰性還是陽性，再根據(jù)形態(tài)、酶反應(yīng)、顯色等不同方法，將具體微生物種類鑒定出來。

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染色法、培養(yǎng)法是基于傳統(tǒng)的涂片鏡檢，在顯微鏡下觀察變化。培養(yǎng)法的技術(shù)是微生物培養(yǎng)、鑒定和藥敏檢測，也是微生物檢測技術(shù)中為重要和成熟的部分。而非培養(yǎng)法是基于酶生化反應(yīng)，利用微生物繁殖過程中產(chǎn)生的特異性酶與一顯色底物發(fā)生顯色反應(yīng)而實(shí)現(xiàn)檢測，主要適用于細(xì)菌性陰道病檢測。

對于絕大多數(shù)的微生物檢測有一個繞不開的環(huán)節(jié)，那就是標(biāo)本處理和培養(yǎng)。需要首先對樣本進(jìn)行預(yù)處理，根據(jù)涂片染色的結(jié)果選擇合適的培養(yǎng)基分離培養(yǎng)。然后根據(jù)菌落特點(diǎn)，選擇適當(dāng)?shù)纳磻?yīng)或者自動儀器鑒定。藥敏檢測則采用紙片法或直接上自動化儀器分析。

只有通過培養(yǎng)得到的各類致病菌，也就是陽性標(biāo)本，才會做進(jìn)一步的鑒定和藥敏檢測。在歐美細(xì)菌培養(yǎng)的陽性率在35%左右;根據(jù)《中國體外診斷產(chǎn)業(yè)發(fā)展藍(lán)皮書2015年》發(fā)布數(shù)據(jù)，我國陽性率比較低，只有20%-30%。

總結(jié)下來，傳統(tǒng)微生物檢測方法有三個方面的問題。一個是樣品培養(yǎng)導(dǎo)致檢測時(shí)間長，傳統(tǒng)生物檢測時(shí)間短到幾小時(shí)，長到幾天都有可能。二是鑒定出來的種類有限，準(zhǔn)確度一般。上面已經(jīng)說過的細(xì)菌培養(yǎng)陽性率很低，而且可培養(yǎng)的細(xì)菌數(shù)量只占病原微生物很小的比例。第三是流程較復(fù)雜，離不開人工干預(yù)，尤其是樣本處理和培養(yǎng)階段很難用自動化儀器取代。

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基于NGS和質(zhì)譜的微生物檢測技術(shù)為行業(yè)變革帶來契機(jī)

基于NGS與質(zhì)譜技術(shù)的微生物檢測數(shù)據(jù)分析方法具有無需預(yù)先培養(yǎng)樣本、靈敏度高、能夠檢測未知的微生物的特點(diǎn)，為疾病防控和生物食品安全提供了新的解決方案。

二者有幾個明顯優(yōu)勢：1、速度快，例如質(zhì)譜的檢測時(shí)間以分鐘計(jì)，可實(shí)現(xiàn)高通量檢測。2、省去樣品培養(yǎng)環(huán)節(jié)，無法培養(yǎng)的微生物也可以檢測。目前多均可檢測多達(dá)2000余種病原微生物，遠(yuǎn)高于傳統(tǒng)的152種。 3、試劑耗材相對傳統(tǒng)使用較少，成本主要是測序儀、質(zhì)譜儀設(shè)備投入。

不管是NGS還是臨床質(zhì)譜檢測，臨床應(yīng)用的探索與開發(fā)僅有十年左右。NGSIllumina于2010年推出Hiseq2000 奠定其行業(yè)地位，同年NIPT開始初步應(yīng)用于臨床，至今NIPT仍然是NGS成熟的商業(yè)化應(yīng)用。而在臨床質(zhì)譜領(lǐng)域，目前應(yīng)用相對成熟的微生物鑒定，從開發(fā)至今也不到十年。

NGS和質(zhì)譜的臨床應(yīng)用均未被*開發(fā)，未來仍有較強(qiáng)的平臺延展性?；驒z測通過對疾病的本質(zhì)與起源進(jìn)行檢測分析，獲得的診斷結(jié)果和合適的治療方案，臨床上可以用于婦幼、腫瘤、遺傳病等多個領(lǐng)域。而質(zhì)譜可以直接對體內(nèi)各種物質(zhì)及其代謝產(chǎn)物進(jìn)行定量檢測，全程對疾病的診斷、治療、預(yù)后進(jìn)行監(jiān)測，目前已經(jīng)應(yīng)用于婦幼、感染、遺傳病等領(lǐng)域?；驕y序需要通過大數(shù)據(jù)分析獲得結(jié)果和疾病的相關(guān)性，而質(zhì)譜需要的則是不斷完善數(shù)據(jù)庫，以提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

目前國內(nèi)僅梅里埃和BD兩家外企，及北京毅新博創(chuàng)的微生物質(zhì)譜獲得CFDA認(rèn)可。雖然外企大范圍市場推廣時(shí)間較短(約2-3年)，市場總裝機(jī)量不超過400臺，但是根據(jù)2016年檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)網(wǎng)的數(shù)據(jù)，2015年在細(xì)菌鑒定和藥敏檢測中，梅里埃的質(zhì)譜儀已達(dá)到了2%的**率，增長迅速?？傮w來看占據(jù)主導(dǎo)地位的還是梅里埃和西門子的傳統(tǒng)檢測系統(tǒng)，目前合并統(tǒng)計(jì)后生物梅里埃在細(xì)菌鑒定和藥敏檢測中市*率高達(dá)61.1%，西門子緊隨其后為26.7%。

質(zhì)譜技術(shù)在臨床微生物菌種鑒定領(lǐng)域的應(yīng)用，除了技術(shù)本身，更重要的是依賴于質(zhì)譜菌種鑒定數(shù)據(jù)庫。因此，數(shù)據(jù)庫中圖譜的質(zhì)量、數(shù)量都將直接影響鑒定的成功率與準(zhǔn)確率。由于病原微生物分布流行情況不同，實(shí)驗(yàn)室在原有數(shù)據(jù)庫基礎(chǔ)上可補(bǔ)充建立本地病原微生物的質(zhì)譜指紋圖譜庫，提高鑒定成功率。

目前梅里埃和BD的產(chǎn)品均可以鑒定2000多種微生物，安圖生物在微生物檢測領(lǐng)域積累20多年，已開發(fā)出具有自主知識產(chǎn)權(quán)的中國本土化微生物菌株數(shù)據(jù)庫，可鑒定超過1500種微生物。

反觀NGS在微生物領(lǐng)域額應(yīng)用，目前還沒有相關(guān)領(lǐng)域的注冊試劑獲批。國外是通過LDT的方式開展。國內(nèi)目前處在方法學(xué)的標(biāo)準(zhǔn)品驗(yàn)證階段。由中檢院負(fù)責(zé)，華大基因、博奧生物、達(dá)瑞生物和賽哲生物四家公司是批參與標(biāo)準(zhǔn)品驗(yàn)證的行業(yè)玩家。其中華大基因用自己的BGISEQ測序平臺，博奧生物、達(dá)瑞生物兩家用Thermo Fisher的NGS平臺，賽哲生物用的是Illumina平臺。

所謂標(biāo)準(zhǔn)品是行業(yè)對NGS方法學(xué)，即測序平臺的驗(yàn)證。由中檢院“出題”，構(gòu)建一個由1000多種基因組成的樣品“黑箱”，四家受試者在各自的平臺上分析。檢測準(zhǔn)確度達(dá)到一定標(biāo)準(zhǔn)的，就把這種檢測平臺作為方法學(xué)的標(biāo)準(zhǔn)品，后續(xù)可以在這個平臺上開發(fā)產(chǎn)品。毫無疑問，通過通過標(biāo)準(zhǔn)品驗(yàn)證的公司會在行業(yè)建立先發(fā)優(yōu)勢。

數(shù)據(jù)庫是微生物NGS、質(zhì)譜檢測的核心壁壘

通過NGS或者質(zhì)譜平臺拿到序列后，面臨的一個重要問題就是：選擇什么數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對才能得到較好的分類鑒定結(jié)果呢?數(shù)據(jù)庫中圖譜的質(zhì)量、數(shù)量都將直接影響鑒定的成功率與準(zhǔn)確率。如原核的16S rDNA序列，真核的18S rDNA序列、ITS(ribosomalinternal transcribed spacer)序列等。

有兩個關(guān)于人體微生物組的奠基性研究，一個是人類腸道宏基因組計(jì)劃 MetaHIT，由歐盟發(fā)起，8個國家14個研究機(jī)構(gòu)參與。華大基因承擔(dān)了其中關(guān)鍵的測序與分析工作，從2008年1月1日到2012年6月30日，構(gòu)建了個腸道微生物基因集，包含330萬個基因，是近年來腸道微生物研究的里程碑。另一個是由美國國家衛(wèi)生院發(fā)起的人類微生物組計(jì)劃。從2008年到2013年，采集了人體各個部位共超過5000份樣本進(jìn)行了測序和深入的分析，繪制了人體相關(guān)的微生物圖譜，并破解了3000種微生物前基因組，初步建立了人體共生微生物參考數(shù)據(jù)庫。

由于病原微生物分布流行情況不同，這些公開數(shù)據(jù)庫不能*臨床檢測需求。實(shí)驗(yàn)室在原有數(shù)據(jù)庫基礎(chǔ)上需補(bǔ)充建立本地病原微生物的質(zhì)譜指紋圖譜庫，提高鑒定成功率。

2016年初，之江生物(834839.OC)發(fā)布公告稱出資 50 億韓元，約合 2,750 萬元人民幣，認(rèn)購韓國 ChunLab公司390,625 股新增股份,增資后之江生物持有后者 12.93%的股權(quán)。ChunLab公司擁有一個龐大的、非公開的微生物數(shù)據(jù)庫。我們預(yù)測之江生物的這個布局意味著即將會在微生物檢測領(lǐng)域有所作為，也為未來業(yè)績增長創(chuàng)造了很好的先發(fā)優(yōu)勢。

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